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分类四

提取dna的作用(提取dna用什么)

hacker2022-06-11 11:01:25分类四49
本文目录一览:1、提取的基因组DNA有哪些方面的用途?

本文目录一览:

提取的基因组DNA有哪些方面的用途?

关键是看你提取基因组DNA的目的了.可以用于科研研究,制备育苗、抗体、也可以用来做DNA嫁接(重组)实验.

提取DNA的意义

原理:

1.析出溶解在nac1溶液中的dna。

2.用冷酒精提取出含杂质较少的dna。

3.dna在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。

方法步骤:

1.提取细胞核物质:顺时针方向搅拌提取dna的作用,稍快提取dna的作用,稍重。

5

min

2.溶解dna:

3.析出含dna的黏稠物:蒸馏水300ml,逆时针方向搅拌,缓慢

4.过滤:取黏稠物

5.再溶解:顺时针方向搅拌,较慢。3

min

6.过滤:取滤液。

7.提取出含杂质较少的dna,逆时针方向搅拌,稍慢。5

min

8.dna的鉴定:沸水浴5min

大学:

dna提取分为三个基本步骤,每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。

利用研磨或者超声破碎细胞,并通过加入去污剂以除掉膜脂。

加入蛋白酶,醋酸盐沉淀,或者酚/氯仿抽提,以除掉细胞内的蛋白,如与dna结合的组蛋白。

将dna在冷乙醇或异丙醇中沉淀,因为dna在醇中不可溶而黏在一起,这一步也能除掉盐分。

另外,目前也有利用吸附过柱的方法提取dna的商业化试剂盒。

2.细胞的破碎

细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞。方法有三种;①机械方法:超声波处理法、研磨法、匀浆法;②化学试剂法:用sds处理细胞;③酶解法:加入溶菌酶或蜗牛酶,都可使细胞壁破碎。

3.dna提取的几种方法

(1).浓盐法

a.

利用rna和dna在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1m

纳提取化钠抽提,得到的dnp粘液与含有少量辛醇的

氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而dna位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将dna

钠盐沉淀出来.

b.

也可用0.15

mnacl液反复洗涤细胞破碎液除去rnp,再以1mnacl提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.

两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.

c.以稀盐酸溶液提取dna

时,加入适量去污剂,如sds可有助于蛋白质与dna

的分离。在提取过程中为抑制组织中的dnase对dna

的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15mnacl,0.015m柠檬钠,并称ssc溶液,提取dna.

(2).阴离子去污剂法;

用sds或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取dna

.由于细胞中dna与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取dna

(3).苯酚抽提法:苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制提取dna的作用了dnase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与dna

联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而dna溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含dna

的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀dna

。此时dna是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的dna保持天然状态

(4).水抽提法:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去rna,然后将沉淀溶于水中,使dna充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6m.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66%

,80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得dna样品.此法提取的dna中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入sds.

结果就是得到dna

请问细菌DNA提取出来后有什么用途? 因为要写实验报告,所以希望越详细越丰富越好. 谢谢!

一方面提取dna的作用:提取提取dna的作用的DNA是为提取dna的作用了研究其序列,来做一些科学研究,另一方面:这类细菌体内能够产生某种特殊提取dna的作用的物质,通过提取其DNA导出目的基因,导入受体细胞中并使之表达,生产出人类需要的产物.

苯酚、氯仿、异戊醇抽提DNA的原理,以及这三者的作用是什么?

苯酚、氯仿、异戊醇抽提DNA的原理是通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质,再加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

使用苯酚抽提细胞

DNA

时,苯酚的作用是使蛋白质变性,同时抑制了

DNase

的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与

DNA

联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而

DNA

溶于水相。

氯仿的作用是克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。

最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。

(酚易溶于氯仿中)

用酚-氯仿抽提细胞基因组

DNA

时,通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇,为什么?因为异戊醇可以减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡

产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含

DNA

的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。

盐酸胍在提取DNA中的作用是什么?

盐酸胍在提取DNA中的作用是作为提取细胞总RNA实验中的强烈变性剂,盐酸胍溶液可溶解蛋白质,导致细胞结构破坏,核蛋白二级结构破坏,从核酸上解离下来,此外,RNA酶可被盐酸胍等还原剂灭活。

盐酸胍化学式为CH6ClN3,白色或微黄色块状物。用作医药、农药、染料及其它有机合成物的中间体,是制造磺胺类药物及叶酸的重要原料,还可用作合成纤维的防静电剂。

扩展资料

盐酸胍用途

1、可用作医药、农药、染料及其他有机合成中间体。可用来合成2-氨基嘧啶、2-氨基-6-甲基嘧啶、2-氨基-4,6-二甲基嘧啶,是制造磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶等磺胺药物的中间体。

2、盐酸胍(或硝酸胍)与氰乙酸乙酯反应,环合为2,4-二氨基-6-羟基嘧啶,用于合成抗贫血药叶酸。还可用作合成纤维的防静电剂。

3、也可用于蛋白质变性剂。

参考资料来源:百度百科-盐酸胍

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评论列表

  • 性许睬姥(2022-06-11 19:09:54)回复取消回复

    取dna的作用了研究其序列,来做一些科学研究,另一方面:这类细菌体内能够产生某种特殊提取dna的作用的物质,通过提取其DNA导出目的基因,导入受体细胞中并使之表达,生产出人类需要的产物.苯酚、氯仿、异戊醇抽提DNA的原理,以及这三者的作用是什么?苯酚、氯仿、异戊醇抽提DNA的原理是通

  • 语酌萌晴(2022-06-11 13:27:58)回复取消回复

    究,另一方面:这类细菌体内能够产生某种特殊提取dna的作用的物质,通过提取其DNA导出目的基因,导入受体细胞中并使之表达,生产出人类需要的产物.苯酚、氯仿、异戊醇抽提DNA的原理,以及这三者的作用是什么?苯酚、氯仿、异戊醇抽提DN

  • 可难雾敛(2022-06-11 11:46:17)回复取消回复

    cl提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.c.以稀盐酸溶液提取dna时,加入适量去污剂,如sds可有助于蛋白质与dna的分离。在提取过程中为抑制组织中的dnase对dna的降解作