提取dna的作用(提取dna用什么)
本文目录一览:
- 1、提取的基因组DNA有哪些方面的用途?
- 2、提取DNA的意义
- 3、请问细菌DNA提取出来后有什么用途? 因为要写实验报告,所以希望越详细越丰富越好. 谢谢!
- 4、苯酚、氯仿、异戊醇抽提DNA的原理,以及这三者的作用是什么?
- 5、盐酸胍在提取DNA中的作用是什么?
提取的基因组DNA有哪些方面的用途?
关键是看你提取基因组DNA的目的了.可以用于科研研究,制备育苗、抗体、也可以用来做DNA嫁接(重组)实验.
提取DNA的意义
原理:
1.析出溶解在nac1溶液中的dna。
2.用冷酒精提取出含杂质较少的dna。
3.dna在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤:
1.提取细胞核物质:顺时针方向搅拌提取dna的作用,稍快提取dna的作用,稍重。
5
min
2.溶解dna:
3.析出含dna的黏稠物:蒸馏水300ml,逆时针方向搅拌,缓慢
4.过滤:取黏稠物
5.再溶解:顺时针方向搅拌,较慢。3
min
6.过滤:取滤液。
7.提取出含杂质较少的dna,逆时针方向搅拌,稍慢。5
min
8.dna的鉴定:沸水浴5min
大学:
dna提取分为三个基本步骤,每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。
利用研磨或者超声破碎细胞,并通过加入去污剂以除掉膜脂。
加入蛋白酶,醋酸盐沉淀,或者酚/氯仿抽提,以除掉细胞内的蛋白,如与dna结合的组蛋白。
将dna在冷乙醇或异丙醇中沉淀,因为dna在醇中不可溶而黏在一起,这一步也能除掉盐分。
另外,目前也有利用吸附过柱的方法提取dna的商业化试剂盒。
2.细胞的破碎
细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞。方法有三种;①机械方法:超声波处理法、研磨法、匀浆法;②化学试剂法:用sds处理细胞;③酶解法:加入溶菌酶或蜗牛酶,都可使细胞壁破碎。
3.dna提取的几种方法
(1).浓盐法
a.
利用rna和dna在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1m
氯
纳提取化钠抽提,得到的dnp粘液与含有少量辛醇的
氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而dna位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将dna
钠盐沉淀出来.
b.
也可用0.15
mnacl液反复洗涤细胞破碎液除去rnp,再以1mnacl提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
c.以稀盐酸溶液提取dna
时,加入适量去污剂,如sds可有助于蛋白质与dna
的分离。在提取过程中为抑制组织中的dnase对dna
的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15mnacl,0.015m柠檬钠,并称ssc溶液,提取dna.
(2).阴离子去污剂法;
用sds或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取dna
.由于细胞中dna与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取dna
(3).苯酚抽提法:苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制提取dna的作用了dnase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与dna
联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而dna溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含dna
的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀dna
。此时dna是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的dna保持天然状态
(4).水抽提法:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去rna,然后将沉淀溶于水中,使dna充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6m.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66%
,80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得dna样品.此法提取的dna中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入sds.
结果就是得到dna
请问细菌DNA提取出来后有什么用途? 因为要写实验报告,所以希望越详细越丰富越好. 谢谢!
一方面提取dna的作用:提取提取dna的作用的DNA是为提取dna的作用了研究其序列,来做一些科学研究,另一方面:这类细菌体内能够产生某种特殊提取dna的作用的物质,通过提取其DNA导出目的基因,导入受体细胞中并使之表达,生产出人类需要的产物.
苯酚、氯仿、异戊醇抽提DNA的原理,以及这三者的作用是什么?
苯酚、氯仿、异戊醇抽提DNA的原理是通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质,再加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
使用苯酚抽提细胞
DNA
时,苯酚的作用是使蛋白质变性,同时抑制了
DNase
的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与
DNA
联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而
DNA
溶于水相。
氯仿的作用是克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。
(酚易溶于氯仿中)
用酚-氯仿抽提细胞基因组
DNA
时,通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇,为什么?因为异戊醇可以减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡
产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含
DNA
的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
盐酸胍在提取DNA中的作用是什么?
盐酸胍在提取DNA中的作用是作为提取细胞总RNA实验中的强烈变性剂,盐酸胍溶液可溶解蛋白质,导致细胞结构破坏,核蛋白二级结构破坏,从核酸上解离下来,此外,RNA酶可被盐酸胍等还原剂灭活。
盐酸胍化学式为CH6ClN3,白色或微黄色块状物。用作医药、农药、染料及其它有机合成物的中间体,是制造磺胺类药物及叶酸的重要原料,还可用作合成纤维的防静电剂。
扩展资料
盐酸胍用途
1、可用作医药、农药、染料及其他有机合成中间体。可用来合成2-氨基嘧啶、2-氨基-6-甲基嘧啶、2-氨基-4,6-二甲基嘧啶,是制造磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶等磺胺药物的中间体。
2、盐酸胍(或硝酸胍)与氰乙酸乙酯反应,环合为2,4-二氨基-6-羟基嘧啶,用于合成抗贫血药叶酸。还可用作合成纤维的防静电剂。
3、也可用于蛋白质变性剂。
参考资料来源:百度百科-盐酸胍